發(fā)布時間：2021/6/1 8:41:52 閱讀次數(shù)：1247
ELISA試劑盒開發(fā)
ELISA試劑盒法檢測具有高速 快捷 易批量操作等優(yōu)點,不同的生產(chǎn)廠家提供不同種類,不同類型的Elisa試劑盒產(chǎn)品,為科研用戶帶來極大的方便.
鐘鼎生物的 ZoonKit能夠針對特定檢測源,制備特異性抗原抗體,根據(jù)應(yīng)用需要量身定制檢測試劑盒,有效控制檢測試劑成本.我們恪守ELISA試劑盒開發(fā)的八大質(zhì)控原則,成功的為水產(chǎn) 畜禽疫病檢測科研用戶開發(fā)高敏 經(jīng)濟 實用的疫病檢測試
劑盒.
第一部分: 項目溝通
了解項目背景及預(yù)期目標確定開發(fā)方案及計劃.
可根據(jù)您的個性化需要開發(fā)特定ELISA 試劑盒.可采用ELISA夾心法 競爭法（測定抗原） 間接法（測定抗體）或競爭法（測定小分子化合物）定量檢測目標物的含量.
第二部分：免疫原制備
1 分析目標蛋白的基因和氨基酸序列,進行抗原性及表達分析,密碼子優(yōu)化,完成全基因合成.
2 構(gòu)建重組蛋白的原核表達載體.
3 轉(zhuǎn)化E. Coli體系,進行重組蛋白表達誘導(dǎo)和鎳柱親合純化,獲得1～3mg純化重組蛋白,純度>85%.（如需需要真核表達系統(tǒng)表達,鐘鼎亦可提供相關(guān)服務(wù)）
4 制備免疫原用于動物免疫.
如為小分靶標,則通過結(jié)構(gòu)分析進行分子修飾并偶聯(lián)載體蛋白用于免疫及檢測.
第三部分：制備抗體
根據(jù)項目溝通結(jié)果確定制備抗體的種類,一般夾心ELISA需要不同表位的抗體用做配對,建議同時進行多克隆抗體和單克隆抗體的制備.確保高速的獲得高靈敏度的配對方式.其他類型的ELISA根據(jù)具體情況選擇.
1 實驗動物免疫
使用第一部分制備的免疫原免疫2只新西蘭兔和5只BALB/c鼠分別用于多克隆抗體及單克隆抗體的制備.免疫4-5次,收集抗血清檢測效價,ELISA效價大于10萬以上進行多克隆抗血清收集及單克隆抗體雜交瘤制備.
2 單克隆抗體雜交瘤制備
選擇與重組蛋白和天然蛋白免疫反應(yīng)最強的小鼠進行細胞融合,通過ELISA篩選陽性克隆,將陽性克隆進行亞克隆獲得陽性細胞株.將陽性克隆上清進行表位鑒定,反應(yīng)性鑒定及親和力鑒定.選擇不同表位,反應(yīng)性強且親和力高的細胞株進行后續(xù)抗體生產(chǎn).
3 抗體生產(chǎn)
多克隆抗血清進行抗原親和純化,獲得特異性抗體10-20 mg.單克隆抗體生產(chǎn)選擇所需陽性細胞株進行細胞擴增,腹水制備,通過蛋白A親和純化獲得3-5 mg 純化抗體.
第四部分：ELISA 試劑盒制備
1 抗原或抗體標記
根據(jù)開發(fā)ELISA的類型確定標記抗原或者抗體.一般標記HRP 或者生物素.
2 抗原抗體使用濃度優(yōu)化
檢測不同濃度抗原與抗體的反應(yīng)靈敏度,特異性.確定更好的抗原與抗體的使用濃度.
3 包被條件及反應(yīng)條件優(yōu)化
確定包被緩沖液,洗滌緩沖液及酶結(jié)合物保存液；確定抗體反應(yīng)溫度及反應(yīng)時間.
4 回收率測定
將標準品加入陰性樣品中確定回收率,需達到80%-120%的回收范圍.
5 批間差及批內(nèi)差測定
重復(fù)性檢測,批間差及批內(nèi)差需小于15%.
6 穩(wěn)定性測試
通過37度破壞性試驗檢測試劑盒在37度條件下3天,7天,10天,14天的表現(xiàn).同時4度留樣以備長期檢測.一般試劑盒可在4度存放1年.
7 臨床樣品或真實樣本檢測
將客戶提供的其他方法驗證的陽性樣品和陰性樣品進行重復(fù)驗證檢測,確定符合率.
8 試劑盒組裝
組裝5份ELISA試劑盒包括所有組分及說明書
泉州市睿信生物科技有限公司會定期發(fā)布新品推薦和產(chǎn)品規(guī)格參數(shù).公司主要經(jīng)營：elisa試劑盒 大鼠/小鼠/牛/羊/犬elisa試劑盒 人elisa試劑盒 胰島素/白介素/白細胞介素elisa試劑盒等產(chǎn)品.歡迎來電咨詢產(chǎn)品,新聞轉(zhuǎn)自網(wǎng)絡(luò),如果有內(nèi)容侵權(quán)請聯(lián)系本公司,會及時做出刪除處理,謝謝！
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